【一(yī)，製藥(yào)食品行業(yè)空(kōng)氣微(wēi)生物(wù)檢(jiǎn)測背景與需(xū)求(qiú)】

藥品生(shēng)產(chǎn)質量管(guǎn)理規範（GMP），食品(pǐn)安全國家標(biāo)準(zhǔn)以及ISO14698潔(jié)淨室生物汙染控製標準被嚴(yán)格執(zhí)行(háng), 製藥廠提出(chū)了對生(shēng)產(chǎn)環境中空氣(qì)微生(shēng)物濃(nóng)度監(jiān)測(cè)的(dí)更(gēng)高要(yào)求, 醫院也提(tí)出(chū)了(liǎo)對生產環(huán)境(jìng)中(zhōng)空(kōng)氣微(wēi)生物濃(nóng)度監測的更高要求, 生(shēng)物製(zhì)品(pǐn)車間所具備的對生產環境(jìng)中空(kōng)氣(qì)微生(shēng)物濃(nóng)度(dù)監測更加嚴(yán)格的要(yào)求(qiú)得(dé)以凸顯, 食品加(jiā)工(gōng)企業同樣有著對生產(chǎn)環(huán)境中空(kōng)氣微(wēi)生物(wù)濃度(dù)監(jiān)測更(gēng)為嚴(yán)格(gé)的(dí)要求(qiú)。空(kōng)氣(qì)中處(chǔ)在懸浮(fú)狀(zhuàng)態(tài)的(dí)浮(fú)遊菌(jūn), 像細菌，真菌孢子(zǐ)這(zhè)樣的浮遊菌, 是(shì)致使產品遭受汙(wū)染，造成(chéng)批(pī)次報(bào)廢(fèi)甚至(zhì)引發質(zhì)量召回情(qíng)況發生的關(guān)鍵風險源頭。傳(chuán)統(tǒng)的(dí)沉(chén)降(jiàng)法在檢(jiǎn)測(cè)方麵(miàn), 其周期(qī)比較長，靈(líng)敏度相(xiāng)對較(jiào)低, 已經難以滿(mǎn)足現(xiàn)代潔淨(jìng)室對(duì)於(yú)微生物(wù)監(jiān)控(kòng)所(suǒ)提(tí)出的實時(shí)，準(zhǔn)確以(yǐ)及(jí)可追溯這些(xiē)方麵的需求。行業急(jí)切(qiē)地需(xū)求著一種浮(fú)遊菌采(cǎi)樣(yàng)儀(yí)器(qì), 它(tā)要能夠(gòu)進行等速采(cǎi)樣, 具備(bèi)高效捕集(jí)的能(néng)力, 並且(qiě)數(shù)據是可以(yǐ)導出的, 以(yǐ)此(cǐ)來(lái)輔(fǔ)助達(dá)成潔淨(jìng)區(qū)環境(jìng)分級驗證, 以(yǐ)及日(rì)常動態監(jiān)測, 還有(yǒu)超標溯源分析。

【二(èr)，實(shí)驗所(suǒ)需(xū)儀(yí)器與(yǔ)試劑(jì)】

核心儀(yí)器：萊恩(ēn)德空氣(qì)微生(shēng)物采(cǎi)樣(yàng)器(qì)

本(běn)方案推(tuī)薦將萊(lái)恩(ēn)德(dé)LD - KF2型(xíng)空(kōng)氣(qì)浮(fú)遊(yóu)菌采樣(yàng)器(qì)用作核心檢(jiǎn)測設(shè)備(bèi), 注(zhù)意(yì)此(cǐ)型號亦可選(xuǎn)用LD - KF1型。該儀器(qì)是依(yī)據顆(kē)粒撞(zhuàng)擊(jī)原理以及等速采樣理論來(lái)設(shè)計(jì)的。其(qí)采樣口(kǒu)流速(sù)跟(gēn)潔(jié)淨(jìng)室內風速(sù)保(bǎo)持一致, 這(zhè)個(gè)風(fēng)速(sù)大約(yuē)是0.35m/s, 如(rú)此便能(néng)確保(bǎo)采集到(dào)的微(wēi)生物濃(nóng)度能夠如實地反映出環(huán)境(jìng)的(dí)實(shí)際(jì)水平。儀器運(yùn)用航(háng)空鋁這一材(cái)質打(dǎ)造外殼(ké), 其(qí)表(biǎo)明(míng)經過閉孔(kǒng)處理, 利於(yú)進(jìn)行滅(miè)菌消(xiāo)毒(dú), 配備3.5寸彩色觸摸屏(píng), 支持采(cǎi)樣(yàng)量（1至(zhì)9999L可調(tiáo)節(jié)）以及(jí)采(cǎi)樣(yàng)時間等參(cān)數(shù)按(àn)組(zǔ)進(jìn)行(háng)儲(chǔ)存, 多能(néng)夠存(cún)儲256頁數據, 內置熱(rè)敏(mǐn)打印機能(néng)夠即(jí)時打印采樣記(jì)錄, 並且支(zhī)持(chí)通過USB將數據(jù)導出(chū)到電腦之(zhī)處來(lái)便於(yú)歷(lì)史(shǐ)趨勢分(fēn)析。具(jù)備100L/min±5%采樣流量, 搭配12m/s撞擊(jī)風(fēng)速(sù), 可(kě)高效(xiào)捕獲(huò)粒徑是(shì)0.5μm以上顆粒物。能滿足GB/T16293 - 2010及ISO14698標(biāo)準要求。內置6000mAh鋰電池(chí), 可連續(xù)工(gōng)作(zuò)8小時(shí), 實現交直(zhí)流(liú)兩用, 能(néng)適(shì)應不(bù)同(tóng)生產班次(cì)需求。

配套試(shì)劑與耗材(cái)

一種標(biāo)準(zhǔn)的(dí)瓊脂(zhī)培(péi)養皿(mǐn), 其尺寸(cùn)為(wéi)直(zhí)徑(jìng)九零毫米乘以(yǐ)高度十(shí)五毫(háo)米(mǐ), 具有推薦(jiàn)使用(yòng)胰(yí)蛋白腖(dòng)大(dà)豆瓊脂或者沙(shā)氏(shì)葡萄糖(táng)瓊(qióng)脂(zhī)這(zhè)兩種選(xuǎn)擇, 其(qí)中胰(yí)蛋(dàn)白(bái)腖(dòng)大(dà)豆(dòu)瓊脂用(yòng)於細菌培(péi)養(yǎng)，沙(shā)氏(shì)葡萄(táo)糖瓊脂(zhī)用於真菌培養。

消(xiāo)毒(dú)液(yè), 是75%乙醇(chún), 或者(zhě)是(shì)0.1%新(xīn)潔(jié)爾(ěr)滅(miè)溶液, 它(tā)被(bèi)應(yīng)用(yòng)於采樣口, 以(yǐ)及(jí)儀(yí)器表麵的消毒(dú)。

封口膜：培(péi)養(yǎng)皿(mǐn)采集後封存，防止運輸(shū)中汙(wū)染(rǎn)

熱(rè)敏(mǐn)打(dǎ)印(yìn)紙(zhǐ)：適配LD-KF2打印機規格

【三(sān)，標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗操作方法(fǎ)】

樣品(pǐn)前(qián)處理(lǐ)

於(yú)潔淨室或者受(shòu)控(kòng)區(qū)域(yù)之(zhī)內, 采用75%乙醇去(qù)擦拭采樣口以(yǐ)及采樣座的表(biǎo)麵, 等待(dài)酒(jiǔ)精(jīng)揮發之(zhī)後放(fàng)進預滅菌的(dí)TSA或(huò)者SDA培(péi)養(yǎng)皿。留意操作(zuò)之前(qián)要佩(pèi)戴(dài)無菌手(shǒu)套(tào), 避(bì)免(miǎn)手指(zhǐ)汙染(rǎn)培養皿(mǐn)口(kǒu)沿。采樣點的位(wèi)置應當避開(kāi)送風口，回風口(kǒu)以及門(mén)縫(féng), 距離地麵大概0.8 - 1.5m, 用於模擬(nǐ)人員(yuán)的(dí)操作高(gāo)度(dù)。

儀(yí)器準備(bèi)與設置

打開(kāi)萊(lái)恩德LD-KF2采(cǎi)樣器, 點(diǎn)擊(jī)觸(chù)摸(mō)屏(píng)進(jìn)到“參數(shù)設(shè)置(zhì)”界麵, 依據(jù)標準要求(qiú)去(qù)設定采樣量(liáng), 對(duì)於上乘(chéng)級別潔(jié)淨區域(yù)來(lái)講建議設定采樣(yàng)量(liáng)是(shì)1000L也(yě)就是1m³, 至於B級區域則可(kě)以設置成500L, 采(cǎi)樣(yàng)周期能(néng)夠設(shè)置(zhì)為(wéi)連(lián)續模式(shì)或(huò)者定時模式(shì), 確認(rèn)電(diàn)池電量是(shì)充(chōng)足的, 要是在(zài)非(fēi)潔(jié)淨區(qū)域使用, 建(jiàn)議連(lián)接電源適配器(qì)從而(ér)確保(bǎo)氣(qì)泵平穩運行(háng), 關鍵步(bù)驟(zhòu)在(zài)於(yú), 在開(kāi)始(shǐ)采樣之前(qián), 執行一(yī)回“自檢”功(gōng)能, 儀(yí)器會自行檢(jiǎn)測(cè)氣路密封性以(yǐ)及流量穩(wěn)定(dìng)性。

實驗操(cāo)作步驟

1. 取下采樣口(kǒu)上方(fāng)安置(zhì)的防塵(chén)蓋(gài)子, 接著把(bǎ)裝(zhuāng)有瓊脂的培養(yǎng)器皿放置於采(cǎi)樣的座(zuò)子上麵, 然後(hòu)輕輕地(dì)按(àn)壓一下讓其(qí)實(shí)現(xiàn)密(mì)封狀(zhuàng)態。

2. 將采樣口旋(xuán)轉(zhuǎn)復(fù)位(wèi)，聽(tīng)到(dào)“咔嗒(tà)”聲(shēng)即(jí)表示(shì)鎖(suǒ)緊(jǐn)到(dào)位。

3. 單擊“開始(shǐ)采樣”這一操作以後(hòu), 儀器會憑(píng)借100L/min的流量(liáng)來吸氣, 帶有細菌的空氣(qì)經由微孔而撞擊(jī)於(yú)瓊(qióng)脂(zhī)的表(biǎo)麵。在采(cǎi)樣(yàng)的(dí)整(zhěng)個過(guò)程當中, 根本不可以去(qù)移(yí)動儀器, 也(yě)絕對不(bù)能(néng)去觸(chù)碰(pèng)采樣(yàng)口之(zhī)處(chǔ)呀。

4. 待達到(dào)預(yù)先設置好的采樣量(liáng)之(zhī)時, 儀器(qì)會(huì)自(zì)行(háng)停(tíng)止(zhǐ)運轉, 並(bìng)且(qiě)發出提(tí)示的聲音。謹(jǐn)慎地(dì)取下來培養(yǎng)皿(mǐn), 扣(kòu)上皿(mǐn)蓋(gài), 再使(shǐ)用(yòng)封(fēng)口膜進行(háng)密封(fēng)。

5. 於觸摸屏(píng)之上, 鍵入“采(cǎi)樣點(diǎn)編(biān)號(hào)”以及“采樣(yàng)人”, 按下“存(cún)儲(chǔ)”以(yǐ)存留(liú)數據。能挑選“打(dǎ)印”來輸(shū)出(chū)當(dāng)下(xià)之記錄。

數據采集與(yǔ)處(chǔ)理

把(bǎ)采(cǎi)集(jí)完後(hòu)的培養(yǎng)皿放置到恒溫培(péi)養(yǎng)箱裏, TSA培養基在35至37℃度(dù)的條件下培養(yǎng)48小(xiǎo)時(shí), SDA培(péi)養(yǎng)基在25至(zhì)28℃培養5至7天(tiān)。培(péi)養(yǎng)完畢後, 運用菌(jūn)落計數(shù)器(qì)針(zhēn)對平板上的(dí)菌落(là)開展(zhǎn)計數, 算出浮(fú)遊菌濃度(dù)（CFU/m³）。要注(zhù)意(yì), 要是平板(bǎn)菌落(là)數超過(guò)200CFU/皿, 需(xū)記錄(lù)成(chéng)“多不可(kě)計(jì)”, 還要(yào)評估是不是要(yào)增(zēng)加(jiā)采樣(yàng)稀(xī)釋步驟(zhòu)。萊恩德(dé)儀(yí)器(qì)所(suǒ)配(pèi)套(tào)的上位機(jī)軟件能(néng)夠把歷(lì)史(shǐ)數據(jù)依照時間，地點，結果(guǒ)來進行圖(tú)表化分(fēn)析, 輔(fǔ)助(zhù)用戶找(zhǎo)出微生物超標的熱點(diǎn)區(qū)域(yù)。

【四(sì)，實(shí)驗(yàn)結(jié)論與方案優(yōu)勢】

使用(yòng)萊(lái)恩(ēn)德空(kōng)氣(qì)浮遊(yóu)菌(jūn)采樣設備（型號(hào)為(wéi)LD-KF2）, 跟標準瓊(qióng)脂培養(yǎng)辦法相結合, 能(néng)夠有(yǒu)效地達(dá)成(chéng)對(duì)於製藥，食品行當(dāng)潔(jié)淨環境(jìng)裏懸浮著(zhuó)的細菌濃(nóng)度進(jìn)行定量檢(jiǎn)測(cè)。這(zhè)樣(yàng)一(yī)個方案全部符合(hé)GB/T16293 - 2010以(yǐ)及GMP附(fù)錄1檢(jiǎn)測的(dí)要求, 采樣所得(dé)到的(dí)結果重復性較強（多(duō)次(cì)采(cǎi)樣的數(shù)據(jù)變異係數小於(yú)或(huò)等於(yú)10%）。它的核心(xīn)優勢體現為(wéi), 等(děng)速采樣設計防(fáng)止了(liǎo)氣流擾動致(zhì)使(shǐ)的(dí)漏檢或(huò)者過檢情況(kuàng), 數(shù)據切(qiē)實(shí)反映(yìng)出環(huán)境微生物水平, 觸摸(mō)屏(píng)有著參(cān)數存(cún)儲功能(néng), 此(cǐ)功能降低了(liǎo)人工記(jì)錄所產(chǎn)生(shēng)的(dí)誤差(chà), 再配合熱敏打(dǎ)印以及電(diàn)腦導出功(gōng)能(néng), 達(dá)成了(liǎo)全(quán)程數據能夠(gòu)被(bèi)追溯, 輕(qīng)量化的手持機體, 重量僅為(wéi)1.6kg, 還有(yǒu)具有8小時續航(háng)能(néng)力, 能夠滿足(zú)日(rì)常(cháng)巡檢，年度(dù)驗證(zhèng)，應(yīng)急排查(chá)等(děng)各(gè)式各樣(yàng)的場(cháng)景(jǐng)。對(duì)於從(cóng)事(shì)行業的用(yòng)戶來講, 這(zhè)個方案能(néng)夠極大(dà)程度(dù)地提高環(huán)境(jìng)監(jiān)測的(dí)效率(shuài), 具(jù)體(tǐ)表現為(wéi)單(dān)點采樣僅僅需(xū)要十(shí)分鐘, 還能(néng)夠減(jiǎn)少(shǎo)因(yīn)為(wéi)微生物(wù)超過標準(zhǔn)而(ér)致使的批(pī)次報廢的風(fēng)險(xiǎn), 它(tā)是一(yī)種契合國內外法規要(yào)求(qiú)的(dí)理(lǐ)想解決(jué)方案。

【五，參考文獻/相關標準】

1. 國標(biāo)推的一(yī)千六百二十九(jiǔ)三杠兩千一零(líng), 醫(yī)藥(yào)工業潔淨(jìng)室(shì)區域浮遊(yóu)菌(jūn)的測(cè)試(shì)辦法(fǎ)。

2. 國際標準(zhǔn)化組織14698 - 1標(biāo)準與國際標準化組織14698 - 2標準所涉及(jí)的潔淨(jìng)環(huán)境(jìng)和與(yǔ)之關聯相(xiāng)關的(dí)受控(kòng)環境裏的生物(wù)汙(wū)染(rǎn)控製。

3. 專門(mén)針對(duì)藥(yào)品生(shēng)產(chǎn)質量(liáng)管理(lǐ)規(guī)範當(dāng)中(zhōng)包含(hán)的GMP所進行的2010年修(xiū)訂(dìng)版(bǎn)本, 其附(fù)錄(lù)1部分所(suǒ)涉(shè)及(jí)的是(shì)無(wú)菌(jūn)藥品(pǐn)。

4. 在2020年(nián)版(bǎn)本中(zhōng)國(guó)藥(yào)典中, 有著四部(bù)的相(xiāng)關內(nèi)容部分, 其中(zhōng)包含(hán)9205藥品(pǐn)潔淨實(shí)驗室微(wēi)生(shēng)物(wù)監(jiān)測和(hé)控製(zhì)指(zhǐ)導(dǎo)原則。

5. 食(shí)品生產(chǎn)通用衛(wèi)生規範的食品安全國(guó)家(jiā)標(biāo)準是(shì)GB 14881 - 2013。